胆固醇是一种重要的细胞成分，维持胆固醇稳态对正常生理功能至关重要。血浆胆固醇水平升高与各种病理状况有关，最明显的是冠心病，高胆固醇水平导致动脉泡沫细胞形成和斑块堆积，可能导致心脏病发作或中风。细胞胆固醇代谢和血浆胆固醇水平的调节取决于低密度脂蛋白（LDL）受体介导的LDL向特定细胞的摄取。

LDL是血液中胆固醇的主要载体，占血浆总胆固醇的60%以上。LDL通过apoB-100-LDL受体相互作用引发的受体介导的内吞作用被肝组织和肝外组织吸收。内化的LDL颗粒被运送到溶酶体，在溶酶体中降解为游离胆固醇和氨基酸。在人类中，肝脏是LDL分解代谢和LDL受体活性最重要的器官。在肝脏中，LDL可以通过药物干预来调节。

细胞低密度脂肪酸(LDL)摄取试剂盒为研究细胞水平的LDL摄取和调节提供了方便的工具。该试剂盒使用与DyLight结合的人LDL™ 550（Thermo Fisher Scientific Inc.的产品）作为荧光探针，用于检测培养细胞对LDL的摄取。LDL受体特异性多克隆抗体和DyLight™ 488缀合的二级抗体用于鉴定LDL受体的分布。

艾美捷细胞低密度脂肪酸(LDL)摄取试剂盒为研究细胞水平的LDL摄取和调节提供了便利的工具。该试剂盒采用人类低密度脂蛋白结合到DyLight™ 550作为荧光探针，用于检测培养细胞中LDL的摄取。LDL受体特异性多克隆抗体和DyLight™ 包括488个偶联的二抗，用于鉴定LDL受体的分布。

艾美捷细胞低密度脂肪酸(LDL)摄取试剂盒试剂准备：

1.LDL-DyLightTM 550工作溶液

稀释LDL DyLight™ 550（项目编号10011229）1:100，在适当的无血清培养基中。在加入细胞之前，用0.45µm过滤器去除颗粒。

2.TBS-Triton缓冲液

通过将Triton X-100添加到TBS中制备TBS Triton缓冲液

浓度为0.1%。

3.兔抗LDL受体一级抗体

在TBS Triton缓冲液中稀释兔抗LDL受体一级抗体（项目编号10012422）1:100。

4.DyLightTM 488偶联山羊抗兔IgG二级抗体

稀释DyLight™ 488缀合的山羊抗兔IgG二级抗体（项目号10011231），1:100，TBS Triton缓冲液。

细胞处理和LDL DyLightTM 550的摄取：

以下方案适用于96孔板。对于其他尺寸的板，应相应调整每个孔的介质/溶液体积。我们建议每种治疗重复或三次。

1.用3 x 104个细胞/孔接种96孔板，并培养细胞过夜。对于HepG2细胞，在治疗前使细胞生长两天。

2.第二天或第三天，用实验化合物或载体处理细胞24小时，或在典型实验方案中使用的时间段。

3.治疗期结束时，用75-100µl/孔LDL DyLight替换培养基™ 550在无血清培养基中制备的工作溶液。将细胞在37°C下再培养3-24小时，或在典型实验方案中使用的时间。

4.在LDL摄取培养结束时，抽吸培养基并用新鲜培养基或PBS代替。在显微镜下用能够分别测量激发波长540和发射波长570nm的滤光器检查LDL摄取的程度。细胞现在准备好使用第8页所述的程序对LDL受体进行免疫荧光染色。

艾美捷细胞低密度脂肪酸(LDL)摄取试剂盒性能特性：

 

图：Huh7人肝细胞LDL摄取。将Huh7细胞以1 x 104个细胞/孔接种在96孔板中，并使其附着和生长24小时。将LDL DylightTM 550以1:100的稀释度加入无血清培养基中并孵育过夜。通过将Hoechst 33342（项目编号15547）直接添加到培养基中至最终浓度为5µM并在37°C下孵育30分钟，对细胞核进行染色。LDLR染色如试剂盒手册所述完成。使用配备Roper Scientific相机和MetaMorph软件的尼康Eclipse显微镜拍摄荧光图像（200X），并合并到ImageJ中。图A：绿色LDLR染色，图B：红色LDL摄取，图C：蓝色Hoechst，图D：合并图像。