分子生物学复习资料及往年考题

1.2022复习题

1.分子生物学复习资料及往年考题：（已完结）
（1）资料完整版下载链接：（待更新）
（2）重点内容总结：
（3）更新须知：
2022.12.07

中国科学技术大学生命科学学院系
2021-2022 学年第 1 学期考试试卷

课程名称： 分子生物学 课程代码：____
院系：___________________________ 考试形式：闭卷
姓 名： 学 号： 专 业：
题 号 填空题 选择题 名词解释 问答题 总分
得 分 100分

一、填空题（1分/空）
Genotype （Inducer absent）
β-galactosidase Permease (Inducer present）
β-galactosidase Permease
I-P+OcZ+Y-
I+P+O+Z-Y+ （ ） （ ） （ ） （ ）
I+P-O+Z-Y+
I-dP+O+Z+Y- （ ） （ ） （ ） （ ）
I+P+OcZ-Y+
I-P+O+Z+Y- （ ） （ ） （ ） （ ）

2.乳糖操纵子的阻遏蛋白有两个结构域，一个是DNA结合结构域, 另一个是_____。酵母中乳糖的利用其中有一个启动蛋白它有两个结构域，一个是DNA结合结构域，另一个是_____, 与其作用位点是_____。
3.λ噬菌体的即刻早期基因有_____和_____。在裂解途径中它会转录出头尾蛋白及相关的裂解蛋白，这些蛋白转录的启动是由哪一个抗终止基因完成：？
4.蛋白质异形体的产生主要是哪两种机制：和？
5.实时定量PCR有两种荧光探针是_____和。其中第1种有一个荧光基团，还有一个淬灭基团。后一种主要结合DNA双链。
二、选择题（2分/题）
1.RecA是大肠杆菌中recA基因座的产物，具有双重功能，能激活蛋白酶并能改变单链DNA分子，关于RecA的说法不正确的是（ D ）
A.RecA蛋白参与大肠杆菌所有的同源重组途径，有单体和多聚体两种形式
B.RecA是大肠杆菌中recA基因座的产物，具有双重功能.
C.RecA具有核酸酶活性涉及重组修复途径。
D.RecA在剪切修复过程中发挥作用

2.ARE序列存在于许多mRNA的3’非翻译区（3‘UTR）中，包括原癌基因、转录因子、细胞因子的mRNA。它的功能是（ B ）
A.反式调控 B.调控.RNA稳定性 C.AUUUAG重复序列

3泛素－蛋白酶体系统（ubiquitin-proteasome system, UPS）是细胞内蛋白质降解的主要途径，参与细胞内80%以上蛋白质的降解。以下说法错误的是（ C ）
A.泛素含有76个氨基酸残基，分子量约8.5kDa，广泛存在于真核细胞
B.泛素化涉及三个主要步骤：活化，结合和连接，分别由泛素激活酶（E1），泛素结合酶（E2s）和泛素连接酶（E3s）执行
C.E3泛素连接酶的半胱氨酸活性位点与被E1泛素激活酶转移的泛素形成硫酯键

4.对P53的解释，下面哪个是错误的 ( C )？
A.p53是抑癌基因
B.P53基因编码的蛋白质（protein）是一种转录因子（transcriptional factor），其控制着细胞周期的启动
C.p53作为“基因组卫士（guardian of the genome）”，在G1期检查DNA损伤点，监视基因组的完整性。如有损伤，p53蛋白阻止DNA复制，以提供足够的时间使损伤DNA修复；P53发挥作用的原理是野生型P53以二聚体形式与特异位点结合，反式激活 下游生长抑制基因的表达.
D… 细胞中抑制癌变的基因“p53”会判断DNA变异的程度，如果变异较小，这种基因就促使细胞自我修复，若DNA变异较大，“p53”就诱导细胞凋亡。

解析：P53作用机理是野生型P53以四聚体形式与特异位点结合，反式激活下游生长抑制基因的表达。一系列的方式能使P53失活，在一些肿瘤中，单一或两个 P53位点的丧失降低四聚体浓度，无义突变造成P53翻译中断，C端酸性结构域的丢失 影响四聚体形成；最常见的是错义突变，野生型与突变体形成更稳定的四聚体，丧失 正常功能。

5.LexA出现在哪一个DNA修复机制之中？（ B ）
A.光修复 B.SOS应答 C.碱基切除修复 D.错配修复

解析：LexA是阻遏SOS应答的，DNA严重受损后无法由直接修复错配修复等途径修复。就启动SOS修复机制，而SOS系统的基因在平时就是由这个LexA蛋白阻遏沉默的
修复过程是RecA蛋白与DNA的单链缺口结合，然后被激活成蛋白酶，这个蛋白酶能将LexA切除成无活性的俩个片段，这样就启动了SOS应急系统，把DNA强制修复得以继续复制。当然这样的错误率很高。
当修复完成后，RECA蛋白恢复非蛋白水解酶形式，LexA蛋白又逐步积累起来，这样就又建立了阻遏作用。
DNA修复机制的分类：
1.直接修复（光修复）细胞在酶的作用下，直接将损伤的DNA进行修复。 修复是由细菌中的DNA光解酶（photolyase）完成
2.核苷酸切除修复、碱基切除修复 利用DNA聚合酶校读功能（3’-5’外切酶活性）进行修复
3.切除修复（暗修复）碱基切除修复
2个Uv r A 和1个B扫描DNA双链并找到碱基损伤的片段，继而Uv rA解离，Uv r C结合，UvrB在3’端切除4-5个核苷酸，在5’端UvrC切开8个核苷酸，解旋酶Uv r D结合，并释放损伤链，由DNA聚合酶I合成，然后DNA连接酶进行连接。
4.甲基化介导的错配修复（DNA 聚合酶III完成切除的链的合成）
甲基化介导的错配修复：MutS/L在新合成的链捕获碱基错配位点的DNA，Mut L移动以找到甲基化后 ，MutS、MutL complex形成DNA-looping与mut H相互作用，通过Mut H切开非甲基化的子链DNA，继而由DNA聚合酶III合成新的子链片段，由DNA连接酶进行连接。
5.SOS应答
许多被诱导的基因表达产物参与了DNA修复并诱发突变。关键的调控因子是RecA蛋白和LexA阻抑物。

6…基因工程操作的步骤顺序为（ B ）。
A.酶切-连接-增殖-转化-检测
B.酶切-连接-转化-增殖-检测
C.连接-酶切-转化-增殖-检测
D.连接-酶切-转化–检测-增殖

解析：基因工程操作的步骤顺序为 剪，接，增，转，检。剪，接.
剪是用限制性内切酶分别去切割载体跟插入片段。
接是将目的片段跟载体连接到一起。
增：是让目的质粒扩增的过程。
转：将外源质粒转入细胞中。
检：是指对目的片段在细胞中基因组的整合情况的检验。

三、名词解释
1.代谢抑制（catabolite repression）
代谢抑制（catabolite repression）分解代谢物抑制作用又称代谢物阻遏作用，是葡萄糖或代谢物或葡萄糖的降解产物对一个基因或操纵子的阻遏作用。当培养基中同时含有葡萄糖和乳糖时，由于细菌生长优先利用葡萄糖，lac操纵子的表达就会被葡萄糖抑制，这种现象称为分解代谢物抑制。
2.表观遗传（epigenetics）
表观遗传学（epigenetics）则是指在基因的DNA序列没有发生改变的情况下，基因功能发生了可遗传的变化，并最终导致了表型的变化。包括2个水平的调控：基因选择性表达水平调控和转录后调
3.细胞分化（Cell Differentiation）
细胞分化(Cell Differentiation)指同一来源的细胞逐渐产生出形态结构、功能特征各不相同的细胞类群的过程，其结果是在空间上细胞产生差异，在时间上同一细胞与其从前的状态有所不同。细胞分化的本质是基因组在时间和空间上的选择性表达，通过不同基因表达的开启或关闭，最终产生标志性蛋白质.
4.抑制突变（Suppressor mutation）
抑制基因突变(suppressor mutation)是第一次突变产生的表现型常可由第二次突变使野生型的表现型得以恢复（并非真正的回复突变）。抑制基因突变使第一次突变所产生的失活蛋白质回复至原来的具活性（或部分活性）的蛋白质
5.限制酶(Restriction Enzymes)
限制酶(Restriction Enzymes) 一般指限制性核酸内切酶。 限制性核酸内切酶是可以识别并附着特定的核苷酸序列，并对每条链中特定部位的两个脱氧核糖核苷酸之间的磷酸二酯键进行切割的一类酶，简称限制酶
6.PCR。

四、问答题
1.在色氨酸操纵子中，根据色氨酸的浓度、核糖体的位置及RNA的二级结构解释其衰减模型。并解释这种机制为什么在原核中可以，在真核中就不可以。
1．色氨酸操纵子结构：色氨酸操纵子包含操纵基因O，启动子P，及5个结构基因A、B、C、D、E.E与O之间有一段前导序列L。色氨酸操纵子上游存在调节基因trpR，编码阻遏蛋白。
2. 阻遏调控（阻遏蛋白操纵子系统）：当培养基中无色氨酸时，R编码的阻遏蛋白不与O结合，结构基因表达催化合成色氨酸的酶。当培养基中有大量色氨酸时，阻遏蛋白与色氨酸结合而改变构象，形成活性阻遏物,与O结合，阻遏结构基因转录。【减少转录约70倍】
3. 衰减调控（衰减子系统）：L中含有4段特殊序列：序列1编码一个前导肽，前导肽的第10、11位是色氨酸；序列2-3或序列3-4可形成茎环结构。3-4茎环结构是一个转录终止子结构，称为衰减子。
当色氨酸缺乏时，前导肽的翻译停滞于色氨酸密码处，序列2-3形成茎环结构，使序列3、4不能形成衰减子结构，结构基因得以完全转录；当色氨酸充足时，核糖体快速翻译前导肽，并对序列2形成约束，使序列3-4形成衰减子结构，下游的结构基因不被转录。【减少转录约8-10倍】
真核生物中不存在（色氨酸）操纵子结构的原因
（1）操纵子是原核生物为适应环境变化而进化出的一种机制，在外界环境发生不利变化(如能源物质缺乏或改变)时，通过调节基因产物的表达来适应环境变化。作为比原核生物复杂和高等的生物，外界环境对其影响要比原核小，不需要操纵子这类适应机制。
（2）原核生物边转录边翻译，色氨酸操纵子可以进行调控，而真核生物是先转录后翻译。
2.简述三种可以与DNA结合的蛋白结构域的主要特征。

3.突变按照原因可以分为自发突变（Spontaneous mutations）和诱发突变（Induced mutations:），它们产生的原因。
1.自发突变：
（1）DNA复制产生的错误，10-10-10-9的碱基错误率
①Base pair substitution mutation ②Additions and Deletions
（2）自身产生诱变物质的化学改变
①Depurination（脱嘌呤作用） ②Deamination（ 脱氨作用）
2.诱发突变。
（1）电离辐射、UV照射
（2）化学诱变剂（如碱基修饰物）

4.如果乳糖操纵子的阻遏蛋白基因上的一个碱基C为5mC。请解释为什么这一个碱基更容易突变成T。
5－甲基胞嘧啶为突变热点，5－甲基胞嘧啶（MeC）的存在，MeC脱氨氧化后生成T，引起G－MeC→A-T转换，因为5-甲基胞嘧啶突变率很高，它经脱氨基作用就转变成胸腺嘧啶，如果DNA 修复系统不完善，G：C就可能变成G：T 的错配。

5.根据基因组成对转座子类型进行分类。在酵母中发现了X和Y两个有内含子的转座子，其中X转座子转座之后发现其中并没有内含子而Y转座子却含有内含子，请说出他们各自的转座类型并解释其中的转座机制。
（1）根据基因组成，转座子可以分为DNA转座子、类似病毒的逆转录转座子 和 polyA逆转录转座子.
（2）根据转座机制不同，可以将转座子分为两类：I类 复制粘贴型 II类 剪切粘贴型
Y属于逆转录转座子，转座中间体是RNA，该型转座子会先被转录为RNA，然后该RNA被逆转录，再次成为DNA，才被插入到目标位点中，X转座子中的内含子由于不会被转录，所以新的位点就没有原先的内含子了。
X转座子的转座行为就是“剪切后粘贴”。X转座中间体是DNA，其实就是它本身。因此Y转座子又被称为不复制转座子，如IS元件。
解析：转座子根据转座机制不同分为2类：
Class I（（复制-粘贴型））：逆转座子，以RNA为中间媒介，基因组->DNA-> RNA->cDNA->基因组，其中涉及到逆转录，其转座形式类似于复制粘贴。比如最常见的长末端重复逆转座子LTR，在“粘贴”整合过程中，使用到了逆转录病毒类似的整合酶。此外，还有非长末端重复转座子non-LTR，比如，LINE和SINE。
Class II（剪切-粘贴型）：DNA转座子，主要以DNA为媒介，不涉及RNA逆转录。转座形式类似于剪切黏贴

5.表达载体和克隆载体的主要功能是什么？简述它们的异同点？
（1）克隆载体：采用从病毒、质粒或高等生物细胞中获取的DNA作为克隆载体，在载体上插入合适大小的 外源DNA片段，并注意不能破坏载体的自我复制性质。将重组后的载体引入到宿主细胞中，并在宿主细胞中大量繁殖。
（2）表达载体：在克隆载体基本骨架的基础上增加表达元件(如启动子、RBS、终止子等)，使目的基因能够表达的载体。（额外增加了 控制外源基因在宿主细胞内表达的序列）
主要区别：
相同点是都插入了外源基因，涉及基因克隆，不同点如下：
（1）组成不同：克隆载体通常是由质粒、病毒或一段染色体DNA改造而成。而表达载体额外增加了控制插入的外源基因表达的元件(目的基因、启动子、终止子、标记基因)
（2）原理不同 表达载体涉及基因元件的调控
（3）应用不同 克隆载体用于测序建库，表达载体用于大量表达蛋白。

6.请解释EMSA实验的原理及其主要应用。
　 凝胶阻滞（迁移）实验（EMSA，electrophoretic mobility shift assay）：蛋白质可以和末端标记的核酸探针结合，电泳时这种复合物比没有蛋白结合的探针在凝胶中泳动速度慢，表现为凝胶电泳的相对滞后，是一种研究蛋白与核酸分子相互作用的技术。
应用：验证转录因子与启动子相互作用、蛋白-DNA、蛋白-RNA相互作用
解析：EMSA基于蛋白-探针复合物在在凝胶电泳过程中迁移较慢的原理。根据实验设计特异性和非特异性探针，当核酸探针与样本蛋白混合孵育时，样本中可以与核酸探针结合的蛋白质与探针形成蛋白-探针复合物；这种复合物由于分子量大，在进行聚丙烯酰胺凝胶电泳时迁移较慢，而没有结合蛋白的探针则较快；孵育的样本在进行聚丙烯酰胺凝胶电泳并转膜后，蛋白-探针复合物会在膜靠前的位置形成一条带，说明有蛋白与目标探针DNA分子存在互作。

7.请说出原癌基因和抑癌基因的定义，并简述非转导逆转录病毒（non-transducing retroviruses）的生命周期是怎样的？如HIV病毒，针对其治疗的靶点的酶及蛋白有哪些，请举两例。并解释举例的酶和蛋白在生命周期中发挥的功能及作用。
（1）原癌基因（proto-oncogene）是细胞内与细胞增殖相关的基因(如ras G-蛋白 )，是维持机体正常生命活动所必须的，在进化上高等保守。当原癌基因的结构或调控区发生变异，基因产物增多或活性增强时，使细胞过度增殖，从而形成肿瘤。
（2）抑癌基因（tumor suppressor genes），也称肿瘤抑制基因，或俗称抗癌基因，是一类存在于正常细胞内可抑制细胞生长并具有潜在抑癌作用的基因。抑癌基因在控制细胞生长、增殖及分化过程中起着十分重要的负调节作用，它与原癌基因相互制约，维持正负调节信号的相对稳定。当这类基因在发生突变、缺失或失活时可引起细胞恶性转化而导致肿瘤的发生
（3）非转导逆转录病毒（non-transducing retroviruses）的生命周期:
非转导逆转录病毒生命周期涉及病毒的吸附、侵入、逆转录、基因组的整合、表达及释放等过程，这个过程不改变宿主细胞的生长活性。
HIV治疗靶点：
①利用chemokines阻断gp120结合CXCR4 CCR5 co-recepters ②AZT 抑制逆转录酶
③抑制整合酶 ④抑制proteas加工多聚蛋白（表达和释放）
gp120：病毒的外膜糖蛋白，负责结合CD4分子，介导吸附
HIV逆转录酶：介导逆转录过程。AZT在体外对逆转病毒包括人免疫缺陷病毒（HIV）具有高度活性。在受病毒感染的细胞内被细胞胸苷激酶磷酸化为三磷酸齐多夫定，能选择性抑制HIV逆转录酶，导致HIV链合成终止从而阻止HIV复制
解析：
1.HIV属逆转录病毒科慢病毒属，其RNA中含有gag、env 和pol基因以及6种调控基因 〔tat, vif, vpr, vpx (vpu), nef, rev〕。gag基因编码病毒的核心蛋白；pol基因编码病毒复制所需要的酶类（逆转录酶、整合酶和蛋白酶）；env基因所编码病毒包膜蛋白，是HIV免疫学诊断的主要检测抗原。调控基因编码辅助蛋白，调节病毒蛋白合成和复制。
2.HIV主要侵犯人体的CD4+ T淋巴细胞和巨噬细胞，其感染过程包括病毒的吸附、侵入、逆转录、基因组的整合、表达及释放等过程。当感染发生时，病毒的外膜糖蛋白gp120首先与细胞表面的CD4分子结合并与辅助受体CCR5或CXCR4等结合，gp120空间构象发生改变，暴露出跨膜蛋白gp41与细胞膜作用，导致病毒包膜与细胞膜融合，病毒核心进入细胞内，脱壳后病毒基因组在RT作用下以病毒RNA为模板合成cDNA，再以此cDNA为模板合成双链DNA，经环化后在病毒IN的作用下随机整合到细胞染色体上成为前病毒而长期存在并随细胞的分裂而传至子代细胞。此前病毒即为病毒复制时的转录模板，病毒进行复制时，早期转录的长链mRNA经拼接后表达病毒的调节蛋白，待调节蛋白的量到达一定阈值后，病毒进入晚期转录，产生的未拼接的mRNA部分用来指导合成病毒的结构蛋白，部分作为病毒的基因组，与结构蛋白进行装配成为病毒核心颗粒，由胞膜出芽时获得包膜及膜蛋白。

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2.2021复习题

中国科学技术大学生命科学学院系
2020-2021 学年第 2 学期考试试卷

课程名称： 分子生物学 课程代码：____
院系：___________________________ 考试形式：闭卷
姓 名： 学 号： 专 业：
题 号 选择题 简答题 问答题 总分
得 分

一、选择题（8×3）
1.当细胞内具有较高浓度的色氨酸时，色氨酸操纵元只能转录合成一段较短的前导转
录本，而结构基因不被转录，这是转录的弱化作用，是由前导序列中两个连续的色氨酸密码
子介导的。如果色氨酸密码子UGG突变为终止密码子UAG，在色氨酸操存在或不存在两
种情况下，将对色氨酸操纵元的调控机制产生怎样的影响（ ）
A.结构基因持续转录
B.结构基因停止转录
C.继续转录待色氨酸耗尽后停止转录
D.结构基因在色氨酸存在情况下也会逐渐被抑制
2.BRCA1/2是两种具有抑制恶性肿瘤发生的基因，在调节人体细胞的复制、遗传物质DNA损伤修复、细胞的正常生长方面有重要作用。拥有这个基因突变的家族倾向于具有高乳腺癌发生率，通常发生在较年轻时，病人的两侧乳房都确癌，且同时患有卵巢癌。根据这一信息你认为BRCA1/2属于哪一类？
A.原癌基因 B.抑癌基因 C.增变基因 D.致癌基因
【解析】BRCA1和2都是抑癌基因，它参与了修复DNA的过程，还能调控转录。
3.McClintock 1983年获诺贝尔生理学或医学奖，因为她“可移动基因元件的发现，在Ac-Ds系统中，如果Ds存在，籽粒表现为（ ），而当Ac基因存在时，籽粒表现为（ ）
A.有色，无色 B.有色 有色 C.无色 有色 D.无色 无色
4.转录调节蛋白 X，当它通过C 端亮氨酸拉链形成一个具有功能的二聚体时，N 端区域能够特异性的结合转录增强子，从而激活一个在某些极端条件下生存关键的酶的转录。体外结合实验结果显示，如果其中一个蛋白X单体的 DNA结合区发生了突变，它结合增强子的亲和力将极大降低。体外转录实验也证实了即使二聚体中仍有一个单体是野生型，突变体不能够激活它所调控的目标酶基因的转录。请问此种突变属于下面那种类型 （ D ）
A.抑制突变（Suppressor mutation）
B.功能获得性突变（Gain-of-function mutation）
C.功能丧失性突变（Loss-of-function mutation）
D.显性负突变（Dominant negative mutation）
5.大肠杆菌乳糖操纵子含Z、Y、A三个结构基因，分别编码半乳糖苷酶、半乳糖苷透过酶和半乳糖苷乙酰转移酶，此外还有一个操纵序列O，一个启动子P。O、P和下游的3个结构基因Z,Y,A共同组成乳糖操纵子，其上游还有一个调节基因I，如果当lacI- 和lacI+二者同时存在于同一个细胞时，乳糖操纵子（ C ），如果发生lacI-d突变，乳糖操纵子（ ）
A.正常发挥作用，正常发挥作用 B.正常发挥作用 关闭
C.正常发挥作用，持续表达 D.持续表达 持续表达
6.以下不可以说明RNA调节DNA表达的例子是（ B ）
A.色氨酸衰减子 B.mRNA C.microRNA D. siRNA
7.转座基因(transposition gene)，又称为转座子(transposon,Tn)，是染色体上一段可移动的DNA片段，它随机分布在染色体上，可从染色体的一个位置跳跃到另一个位置，甚至从一条染色体跳跃到另一条染色体，以下不可以自发转座的转座子是（ D ）
A.polyA逆转录转座子 B.SINE C.果蝇Copia元件 D. Alu转座子
8.真核生物的基因表达调控中，以下说法错误的是： ( )
A. histone常常对转录是起抑制作用的
B. 基因能够做出多样的调控选择很主要的原因是因为大量的调控蛋白的存在
C. 通常染色体的结构越松散，该基因的转录活性也越高
D. 通常histone乙酰化程度越低，该基因的转录活性也越低
9.对酵母的Ty转座子的以下描述中不正确的是（ ）。
A. Ty转座子是一种逆转录转座子
B. Ty转座子两端具有长的末断重复序列
C. Ty转座子编码一种逆转录酶
D. Ty转座子转座到一个新的DNA靶点时，在靶点两侧形成倒转(inverted)重复序列。
10.siRNA和miRNA描述中不正确的是: ( )
A. siRNA主要是外源的，miRNA主要是内源的
B. siRNA底物比较特异，而一个miRNA通常有多个底物
C. siRNA和miRNA一般都需要通过Dicer的剪切
D. siRNA主要是抑制翻译, miRNA主要是降解mRNA。

二、填空题（每空 1 分）
1.能诱导酶的合成，但又不被分解的分子,称为安慰诱导物（gratuitous inducer）。由于乳糖虽可诱导酶的合成，但又随之分解，产生很多复杂的动力学问题，因此常用 IPTG 安慰诱导物进行各种实验
2.在各类原核生物操纵子系统中，对基因转录调控起关键作用的蛋白和DNA相互作用分别是 RNA Polymerase和 promoter 以及 Activators/repressors 和 operator 之间的相互作用
3.在重组蛋白质的各种表达系统中，表达蛋白质速度最快的是_原核生物表达系统____，蛋白质翻译后修饰最丰富的是 哺乳动物表达系统 。
4.在条件性基因敲除小鼠中，存在 Cre 酶时，两个反向排列的loxP 序列会使得位于 loxP 序列之间的基因__缺失_，两个正向排列的loxP 序列会使位于 loxP序列之间的基因 倒置 使得位于 loxP 序列之间的基因 缺失 。
5.当 λ repressor 占优势地位，会结合到OL1、OL2和OR1、OR2阻止N蛋白和Cro蛋白的表达，使得λ噬菌体进行溶源状态，当 Cro蛋白 占优势地位，会结合到OR3，阻止cI（λ repressor）的表达。
6.φ29DNA 聚合酶具有更好的保真性是因为该酶具有3’-5’proofreading activity，其扩增
方式不同于 Taq 酶是由于 strand-displacement activity（链取代活性）.
7.UV诱导的胸腺嘧啶二聚体，修复方式包括第一种 光解酶 在光的作用下直接修复胸腺嘧啶二聚体，第二种是碱基切除修复（暗修复），然后由DNA聚合酶合成去掉的碱基，并由DNA连接酶连接。
8.酵母双杂交系统主要用于研究 Protein-Protein interaction ，三杂交主要用于研究
RNA-Protein interaction ，单杂交主要用于 DNA-Protein interaction。
9.重组DNA克隆技术技术的发展和普及依赖于两类重要的酶的发展，这两类酶分别是 限制性内切酶 和 DNA连接酶 。识别序列不同但产生相同粘性末端的限制性内切酶称为 同尾酶 。
10.双胞胎兄弟差异的原因可能包括（表观遗传的可能机制）包括 1. DNA甲基化 2. 染色体重塑 3. 组蛋白修饰 ，4. non-coding RNA 。
11.经限制性内切酶酶切的质粒5’端带有磷酸基团，在进行基因克隆时为避免质粒发生自连，可以使用Calf Intestinal Alkaline Phosphatase(牛碱性磷酸酶)去除5’末端磷酸基团。而 T4聚核苷酸激酶 能够催化ATP的γ-位磷酸基团转移到寡核苷酸链(双链或单链DNA或RNA)的5′-羟基末端

三、简答题：
1.一位同学跟着父亲去看望医院患癌症的爷爷，但是母亲却认为癌症可能会传染，担心孩子的安全，请你根据所学知识，分析癌症可以传染吗？
（1）首先绝大多数癌症是不可传染的，癌症的发生往往是多种遗传因素和环境因素导致的机体正常细胞发生基因突变导致的，因此癌症是不可在外部传染的，人体也对外界存在着免疫，正常的交流沟通是不会传染癌症的。
（2）但虽然人类的癌细胞不会直接传染，但有些人的癌症是细菌病毒引起的。细菌病毒是可以传染的，比如流感，艾滋病是病毒传染，而梅毒，结核病则是细菌传染。如肝癌：乙肝病毒（HBV）宫颈癌：人乳头状瘤病毒（HPV）、胃癌：幽门螺杆菌 可以通过一些途径进行传播。

2.假如你在实验过程中发现了一个可能与癌症相关的基因及其突变体，如何设计实验证明其属于原癌基因、抑癌基因和增变基因中的哪一种？
（1）如果把这个基因及其突变体分别转染到正常细胞和癌细胞内，突变体能使正常细
胞 transform癌化，而野生型没有，那么这个基因是原癌基因。
（2）如果把这个基因及其突变分别转染到正常细胞和癌细胞内，野生型能够抑制癌细
胞生长。同时突变能使正常细胞 transform癌化，那么这个基因是抑癌基因。
（3）如果把这个基因及其突变分别转染到正常细胞和癌细胞内，突变体能够导致很多其他基因的突变，并且导致正常细胞 transform癌化， 那么这个基因是增变基因。

3.噬菌体展示技术及其应用。
噬菌体展示技术：是将一段外源基因插入到噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置，在阅读框正常且不影响外壳蛋白正常功能的情况下，外源基因会随着外壳蛋白的表达而表达，从而使多肽或蛋白以融合蛋白的形式展现在噬菌体表面。被展示的蛋白可以保持相对独立的空间结构和生物活性，有利于靶蛋白的结合，因而可以利用靶蛋白快速的进行噬菌体展示抗体库的筛选。在展示文库构建完成后，以靶蛋白为固定相，和展示文库共同孵育一段时间，洗去未结合噬菌体，再以竞争受体洗脱吸附的噬菌体，便可以得到能与靶蛋白特异性结合的噬菌体的高度富集。
应用：筛选得到的高度亲和力的噬菌体集合中可能含有多个克隆，可以利用ELISA或Westen Blot进一步对得到的外源蛋白进行筛选，或对蛋白进行铺盘分离单克隆菌株，从而得到特异性的单克隆抗体，进而进行生物学方面研究

4.哺乳动物基因组中有大约105个基因，而它们可以产生106到109种不同的抗体。请解释这种现象。
抗体的数量并不是和基因的数量一一对应的，抗体的多样性主要来源以下几个因素：
1.抗体分重链和轻链
2.在B 细胞发育过程中，不同的轻链是由特异的V和J区域的 DNA 重组产生重链则是由特异的V，D.J区域重组产生
3.同时轻链和重链在不同区域重组的交接处存在不精确的结合，这种现象被称之为体细胞重排

5.为什么说肿瘤基因都来源细胞基因?
（1）细胞原癌基因的染色体位置都是保守的，但是对应的v-onc在病毒的基因组的结构和位置中却是可变的
（2）V-onc在细胞的同源基因进化上保守，但是v-onc在不同的病毒株间不保守
（3）转导在细胞和动物实验培养中成功实现也是一大证据。

6.简述DNA修复机制有哪些？
1.直接修复（光修复）
细胞在酶的作用下，直接将损伤的DNA进行修复。 修复是由细菌中的DNA光解酶（photolyase）完成
2.核苷酸切除修复、碱基切除修复
利用DNA聚合酶校读功能（3’-5’外切酶活性）进行修复
3.切除修复（暗修复）碱基切除修复
2个Uv r A 和1个B扫描DNA双链并找到碱基损伤的片段，继而Uv rA解离，Uv r C结合，UvrB在3’端切除4-5个核苷酸，在5’端UvrC切开8个核苷酸，解旋酶Uv r D结合，并释放损伤链，由DNA聚合酶I合成，然后DNA连接酶进行连接。
4.甲基化介导的错配修复（DNA 聚合酶III完成切除的链的合成）√
甲基化介导的错配修复：MutS/L在新合成的链捕获碱基错配位点的DNA，Mut L移动以找到甲基化后 ，MutS、MutL complex形成DNA-looping与mut H相互作用，通过Mut H切开非甲基化的子链DNA，继而由DNA聚合酶III合成新的子链片段，由DNA连接酶进行连接。
5.SOS应答
许多被诱导的基因表达产物参与了DNA修复并诱发突变。关键的调控因子是RecA蛋白和LexA阻抑物。

中国科学技术大学生命科学学院系
2017-2018 学年第 1 学期考试试卷

课程名称： 分子生物学 课程代码：____
院系：___________________________ 考试形式：闭卷
姓 名： 学 号： 专 业：
题 号 选择题 名词解释 简答题 问答题 总分
得 分

一、选择（涉及内容）
1.Trp是corepressor
2.哪些是异构蛋白（lacI，CAP和TrpR）
3.癌基因的类型与判断
4.c-m（Ac）玉米的表型
5.人类基因组中的重复序列与哪种转座子有关

二、填空
1.LacI-d的突变位点及其单倍体表型
2.部分二倍体中，某种基因型的permease（注意是lacY）表达类型
3.两种原核生物转座子
4.重组DNA克隆技术通过将DNA片段插入到质粒载体的特定区域而构建重组DNA分子，该技术的发展和普及依赖于两类重要的酶的发展，这两类酶分别是限制性内切酶和DNA连接酶。
5.重组克隆过程中对载体5’端脱磷的酶是磷酸酶(碱性磷酸酶，CIP)
6.通过qPCR比较特定基因在不同细胞中的表达量时，能更好地体现产物特异性的荧光探针是TaqMan Probe
7.酵母单杂交、双杂交、三杂交分别用来检测什么相互作用
8.表观遗传学的定义和四个内容
（1）表观遗传学（epigenetics）则是指在基因的DNA序列没有发生改变的情况下，基因功能发生了可遗传的变化，并最终导致了表型的变化
（2）表观遗传学的研究内容主要包括两类，一类为基因选择性转录表达的调控，有DNA甲基化、基因印记、组蛋白共价修饰和染色质重塑；另一类为基因转录后的调控，包括基因组中非编码RNA、微小RNA、反义RNA、内含子及核糖开关等。
四大内容指 DNA甲基化，染色体重塑 组蛋白修饰，及转录后调控的non-coding RNA。
9.识别序列不同但产生相同粘性末端的限制性内切酶称为同尾酶。
10.产生抗体多样性的原因
11. RNA加工的两个选择
12.用一种限制酶切DNA产生平均约4000bp的片段，识别序列长度是多少

三、名词解释

1.多顺反子：一个mRNA分子编码多个多肽链。这些多肽链对应的DNA片段则位于同一转录单位内，共同拥有一个转录的起点和终点。多见于原核生物
2.体细胞重组somatic recombination 淋巴细胞在发育成熟的过程中，抗体基因通过不同的基因片段的排列组合，产生抗体多样性的淋巴B细胞的过程
3.条件型突变 （conditional mutation）野生型生物可生育或增殖的条件下,而不能生育或增殖的突变型,即需要特定的营养物质的营养缺陷型以外的突变型,称为条件型突变
4.穿梭质粒 是指一类具有两种不同复制起点和选择标记，因而可以在两种不同类群宿主中存活和复制的质粒载体。此概念不仅用于不同的微生物菌群之间，也可以推广到真核生物表达载体的构建，如用于枯草的pBE2、酵母的pPIC9K、哺乳动物表达载体pMT2 和用于植物细胞的Ti 质粒。

四、问答
1.CAP突变导致失活对lac表达的影响，发生组成型突变又产生怎样的影响。
2.Trp operon的衰减子机制，以及为什么不发生在真核生物中。
3.细菌中一种特殊的突变intergenic nonsense suppressing mutation，图解或举例说明。
4.为什么说tumor virus的致癌基因来自细胞。
5.证明Ty转座子是一种反转录转座子的两种方法。√
6.噬菌体展示技术及其应用。
7.lambda噬菌体的生命周期调控机制和人为控制方法。
8.检测体内蛋白互作的两种方法，FRET和BiFC。

中国科学技术大学生命科学学院系
2015-2016 学年第 1 学期考试试卷

课程名称： 分子生物学 课程代码：____
院系：___________________________ 考试形式：闭卷
姓 名： 学 号： 专 业：
题 号 选择题 名词解释 简答题 问答题 总分
得 分

一、选择题（每题2分，共10分）

1. 在色氨酸操纵子中，衰减作用通过前导序列中两个色氨酸密码子的识别而进行，如果这两个密码子突变为终止密码子，会有什么结果? D
   A.该操纵子将失去对色氨酸衰减调节的应答功能
   B.突变为组成型基因，不受色氨酸存在与否的调节
   C.将合成色氨酸合成酶
   D.以上现象都会发生

2.如果 Cro蛋白不能结合 DNA，那么这个λ噬菌体将
A.进入溶原途径（lysogenic cycle）
B.进入裂解途径（lytic cycle）
C.可以被UV诱导
D其N蛋白不起作用。

3.不属于表观遗传变化的是 B
A.DNA甲基化
B.DNA突变
C.组蛋白乙酰化
D.染色体重塑

4.转录调节蛋白 X，当它通过C 端亮氨酸拉链形成一个具有功能的二聚体时，N 端区域能够特异性的结合转录增强子，从而激活一个在某些极端条件下生存关键的酶的转录。体外结合实验结果显示，如果其中一个蛋白X单体的 DNA结合区发生了突变，它结合增强子的亲和力将极大降低。体外转录实验也证实了即使二聚体中仍有一个单体是野生型，突变体不能够激活它所调控的目标酶基因的转录。请问此种突变属于下面那种类型 D
A.抑制突变（Suppressor mutation） B.功能获得性突变（Gain-of-function mutation）
C.功能丧失性突变（Loss-of-function mutation） D.显性负突变（Dominant negative mutation）

5.人基因组的修复系统不包括 D
A.DNA聚合酶校对修复 B.核苷酸切除修复
C.甲基化指导的错配修复 D.紫外照射引起的嘧啶二聚体的直接修复

二、填空题（每空1分，共25分）
1.在各类原核生物操纵子系统中，对基因转录调控起关键作用的蛋白和DNA相互作用分别是 RNA Polymerase和_promoter 以及 Activators/repressors 和perator 之间的相互作用。
2.真核生物的基因表达调控分为哪几个层次的调控∶转录、前体RNA的加工、mRNA 的转运、翻译、RNA降解、蛋白降解。
3.噬菌体的三组基因是早早期基因、晚早期基因、晚期基因。它进入溶原还是裂解途径取决于λCI还是Cro蛋白占据L和R的operator。
4.在线虫和一些植物中，RNAi的作用会被放大，siRNA除了正常的引导目标 RNA 降解外，还可_作为引物导致siRNA的扩增。
5.利用重组 DNA 克隆技术构建质粒时，连接外源DNA片段和载体需要 DNA末端具_和3’羟基有5’磷酸
6.最近出现的__CRISPR/Cas9技术已成功应用于制备基因敲除小鼠
7.用于体外确定蛋白质在 DNA 片段上的结合位点的方法是_DNA footprinting
8.在条件性基因敲除小鼠中，存在 Cre 酶时，两个反向排列的loxP 序列会使得位于 loxP 序列之间的基因__缺失_，两个正向排列的loxP 序列会使位于 loxP序列之间的基因 倒置 使得位于 loxP 序列之间的基因 缺失 。
9.DNA 芯片以杂交的方法检测基因表达，而SAGE 则以测序法来检测。
10.在重组蛋白质的各种表达系统中，表达蛋白质速度最快的是_原核生物表达系统____，蛋白质翻译后修饰最丰富的是 哺乳动物表达系统 。
11.有一条2，032 bp的DNA片段 M，含有两处限制性内切酶 Acc III的酶切位点TCCGA，分别在第 200 bp和608 bp处，已知TCCGGA在某甲基化酶D的作用下被修饰成T"CCGGA，但 Acc III 酶对这种甲基化不敏感，请问用Acc III酶切被甲基化酶D修饰的M片段，会得到的DNA条带数是_ 3 条。

三、简答题（每题3分，共15分）

1. RNA 在基因表达中是否起调控作用? 举两个例子说明。
   例子1∶tryptophan operon 里1eader RMA序列不同区段的RNA发卡结构的组合（1-2或2-3或3-4区）会影响 transcription 的进程（暂停、前进或终止）（1分）。
   例子2∶miRNA 或 siRNA对mRNA 的抑制或降解。（1分）

2. 什么是别构效应?效应子（effectors）起到什么作用?举例说明。
   一个蛋白质与其配体或其他蛋白质（效应子）结合后，蛋白质的空间结构发生改变，使它适用于功能的需要，这一类变化称为别构效应或变构效应（十分）。effectors 可以改变调控蛋白的构象（1分）。比如异乳糖对 LacI 的调控，或trpytophan 对 aporepressor 的调控。（1分）

3.一个E，coli菌株不论有没有诱导剂（inducer）存在都能产生β-半乳糖苷酶，由此判断这个菌株有什么基因型?此类突变称之为何种突变?
lacI （1分）或lac0° （1分）。组成型突变（1分）

4.举例说明转导性逆转录病毒（transducing retrovirus）与非转导性逆转录病毒（nontransducing retrovirus）的共同点与不同点。
共同点∶都含有gag/pol/env三个基因及调控的LTR 序列（1分），不同点∶transducing retrovirus 如劳氏肉瘤病毒RSV有viral oncogene（1分），且除了RSV，其他转导性逆转录病毒不具有完整的gag/pol/env 基因，不能形成完整的增殖周期∶而 nontransducing retrovirus 如HIV，无viral oncogene（1分），包含有完整的 gag/pol/env，形成完整的生命周期。

5.有一位专家说∶"如果我们活得足够长，最终每个人都会得癌症"。你同意上述说法吗?为什么?
基本同意（1 分）。因为癌症是一种 genetic disease。我们知道基因突变是随时发生的，可以被阳光中的紫外线，或者接触到的多种化学物质诱导。人到老了，由于突变修复功能的下降，会导致基因突变的积累（1分））。如果突变发生在与癌症相关的三类基因分别是原癌基因（proto-oncogene），抑癌基因（tumor suppressor gene）和致突变基因（mutator gene），会导致细胞的癌化（1分）。

四、问答题（每题5分，共50分）

1. 在用来源于某个基因的探针对cDNA 文库筛选的时候发现有四种不同的cDNA。根据其与基因组 DNA序列的比对，可以确定它们的外显子和内含子分布如下图所示（实心长方形为外显子，细线为内含子，灰色长方形为5’或3’UTR区域）

请回答以下问题∶
1）这个基因编码几种蛋白亚型?
2）分析产生这几种蛋白亚型的转录后调控（posttranscriptional control）的机制?
3）如何用实验证明这几种蛋白亚型具有不同的功能?1）
答案：
1）四种。（1分）
2）Alternative splicing。（2分）
3）设计针对特异蛋白亚型的RNAi 去特异地敲减该蛋白亚型的mRNA，观察其产生的表型。（2分）

2.原核生物和真核生物在转录调控中有哪些共同点?有哪些不同点?有什么原因造成或导致了这些不同?
1）同样依赖与两类 DNA-Protein的相互作用（promoter-RNA polymerase，regulatory response elements=aetivator/repressor）。（2分）
2）原核生物里转录和翻译是coupled，真核生物转录和翻译在时间和空间上是分开的。（1分）

3.哺乳动物基因组中有大约105个基因，而它们可以产生106到109种不同的抗体。请解释这种现象。
抗体的数量并不是和基因的数量一一对应的，抗体的多样性主要来源以下几个因素：
抗体分重链和轻链
在B 细胞发育过程中，不同的轻链是由特异的V和J区域的 DNA 重组产生重链则是由特异的V，D.J区域重组产生
同时轻链和重链在不同区域重组的交接处存在不精确的结合，这种现象被称之为体细胞重排

4.简述 CRISPR系统的结构组成，请结合ZFN/TALEN的结构特点设计实验以降低CRISPR 的脱靶效应。

（1）CRISPR 由特异性结合靶标DNA/RNA的 guideRNA 和具有核酸酶活性的CAS9 组成。（1分）
（2）突变核酸酶活性的 cas9为 dcas9（1分））
（3）ZFN/TALEN 由特异性 DNA结合结构域与非特异性核酸酶FOK1构成（1分）可设计将 dCAS9与 FOK1偶联，形成二体作用模式，增强特异性，降低脱靶效应。（2分）

5.与癌症相关的基因包括哪三类?一位研究人员新发现了一个可能与癌症相关的基因及其突变体，请设计实验并给予分析，以确定该基因属于其中的哪一类。
包括原癌基因（proto-oncogene）、抑癌基因（tumor suppressor gene）和增变基因（mutator gene）（2分）。
①如果把这个基因及其突变体分别转染到正常细胞和癌细胞内，突变体能使正常细
胞 transform癌化，而野生型没有，那么这个基因是原癌基因（1分）。
②如果把这个基因及其突变分别转染到正常细胞和癌细胞内，野生型能够抑制癌细
胞生长。同时突变能使正常细胞 transform癌化，那么这个基因是抑癌基因（1分）。
③如果把这个基因及其突变分别转染到正常细胞和癌细胞内，突变体能够导致很多其他基因的突变，并且导致正常细胞 transform癌化， 那么这个基因是增变基因（1分）。
6.插入序列（Insertion sequence element）是最简单的细菌转座子，仅含有转座所必需的因子。请用图解的方式，描述一个IS元件的组成结构，及插入目标序列的过程和特点。

IS 元件是一小段 DNA 序列，通常都不大，包括末端9-41bp近乎完美的反向重复序列（IR）以及编码转座酶的基因（1分）。首先，目标序列被转座酶切开成为粘性末端，IS元件作为平端双链DNA插入（2分），然后通过宿主的DNA聚合酶启动修复机制，缺口被填上。这样目标序列在IS元件的两端形成直接重复序列（dR）（2 分）。

7.1971年，美国科学家Alfred Knudson 发表了一篇 PNAS 文章，通过对视网膜母细胞瘤患者的家系病例进行统计学分析，提出了著名的双命中突变模型（Twohit mutation model）。下面是文章中的部分数据，48例病人中23例是双眼都患病，是可遗传的，25例是只有单眼患病，75%是散发性的（sporatic）。其中单眼患病的全部无家族史，而双眼都患病的，有3例有家族史。请用双命中突变模型，解释眼癌的发病机制。
由抑癌基因Rb的失活导致的（1分）。要发展成一只特定眼球的眼癌，需要在体细胞内两个拷贝的Rb 基因发生突变，而同一个细胞里两个独立突变概率非常低，所以散发性病人大多都是单边肿瘤（2分）。那些可遗传的个体，已经携带一个从母代生殖细胞继承的突变。因此只需在体细胞内再出现突变，就能癌变（2分）。

8．现有编码拟南芥转录因子ARFI的cDNA片段和DNA随机序列库，请设计体内实验筛选和ARF1有相互作用的DNA 序列，并描述流程。
用酵母单杂交的方法。（3分）流程如下∶（2分）
（1）构建 Bait质粒，将 ARF1和RNA 聚合酶串联表达;
（2）构建Prey质粒库，在HIS3和URA3报告基因前插入随机 DNA序列;
（3）将 Prey 质粒库转入E.coli细胞;
（4）涂布在含有5-FOA的平板上，抑制含自激活DNA序列的E.coli生长;
（5）将含有 ARFI cDNA的Bait质粒转入上述Prey库细胞，涂布在缺少His，但含
有3-AT的最小培养基上;
（6）挑选生长克隆，将Proy 质粒的 DNA 片段测序。

9．多梳抑制复合体 PRC2 催化组蛋白产生 H3K27me3，这是一种重要的表观遗传学标记。现有组蛋白H3K27me3抗体，请问用何种方法可以研究这种组蛋白修饰与调节基因表达之间的关系，并描述实验过程。
用染色质免疫共沉淀的方法（ChTP）。（3分）实验过程如下∶（2分）
（1）在活细胞内加入甲醛等交联剂，固定有相互作用的组蛋白和 DNA;（2）超声破碎细胞;
（3）加入H3K27me3的抗体，与H3K27 me3-DNA复合物相互作用;（4）加入 protein A，结合复合物，并沉淀（5）清洗沉淀的复合物，除去非特异性结合;（6）洗脱，得到富集的 H3K27 me3-DNA复合物;（7）解交联，纯化富集的DNA片段;（8）PCR及数据分析。

10.已知一段DNA序列含有BstBI、EcoR I、Age I、Not I和Pst I限制性内切酶酶切位点，准备将这段DNA序列克隆到某载体的BstB工和Age 工酶切位点上，请选择合适的酶切位点分别加在两条PCR引物的5’端，并描述PCR 克隆构建重组质粒的流程。
BstI:TTrCGAA, EcoRI:G^ATTC, AgeI:ACGCT,NotY:GCcGcGc Pst/I:CTGCA’G BsiHKA I:GTGCA^C, Axa I:CCCGG, Acc I:GT^CGAC
应添加的酶切位点为Acc Ⅰ和Ava I。（3分）PCR 克隆构建重组质粒∶（2分）
（1）设计含酶切位点的引物，PCR扩增外源DNA片段;（2）限制性内切酶酶切外源片段与载体;（3）连接外源片段与载体∶（4）转化连接液到感受态细胞;（5）PCR或者酶切鉴定筛选阳性克隆;（6）测序鉴定。

3.2020复习题

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中国科学技术大学生命科学学院系
2018-2019 学年第 1 学期考试试卷
课程名称： 分子生物学 课程代码：____
院系：___________________________ 考试形式：闭卷
姓 名： 学 号： 专 业：
题 号 选择题 简答题 问答题 总分
得 分
一、选择题
1.UV照射等会导致DNA的损伤，使噬菌体进入到裂解的途径，这其中需要通过激活RecA来降解下面哪个基因产物： （　 　）
A．Cro B. Q C. CI D. N
2. 真核生物的基因表达调控中，以下说法错误的是： ( )
A. histone常常对转录是起抑制作用的
B. 基因能够做出多样的调控选择很主要的原因是因为大量的调控蛋白的存在
C. 通常染色体的结构越松散，该基因的转录活性也越高
D. 通常histone乙酰化程度越低，该基因的转录活性也越低
3. 酵母galactose-utilizing genes的表达调控方式中，描述错误的是: ( )
A．galactose-utilizing genes包括GAL1,7,10
B．在没有galactose情况下GAL4不能结合在UAS上,从而无法激活转录
C. 在有galactose情况下,galactose代谢物导致GAL4特定位点磷酸化
D. GAL4特定位点磷酸化会导致GAL4构象发生改变,GAL4转变成激活形式,激活转录
4．siRNA和miRNA描述中不正确的是: ( )
A. siRNA主要是外源的，miRNA主要是内源的
B. siRNA底物比较特异，而一个miRNA通常有多个底物
C. siRNA和miRNA一般都需要通过Dicer的剪切
D. siRNA主要是抑制翻译, miRNA主要是降解mRNA
5. 不是肿瘤抑制基因的是：（ ）
A．RB B. DCC C. ras D.APC
6．不是retrovirus的是：（ ）
A．Rous sarcoma virus B. Feline leukemia virus
C. Human Immunodeficiency virus D. Adenovirus 腺病毒
7.诱变剂溴化乙锭（EB）较易引起哪种突变（ ）。
A. 无义突变（nonsense mutation）
B. 沉默突变（silent mutation）
C. 移码突变（frameshift mutation）
D. 错义突变（missense mutation）
8.以下哪种突变由于不易被修复而往往成为突变的热点（mutation hot spots）： （ ）
A.A的depurination
B.Deamination of C to U
C.Deamination of 5-mC (5-甲基C)to T
D.TT dimer
9.对酵母的Ty转座子的以下描述中不正确的是（ ）。
A. Ty转座子是一种逆转录转座子
B. Ty转座子两端具有长的末断重复序列
C. Ty转座子编码一种逆转录酶
D. Ty转座子转座到一个新的DNA靶点时，在靶点两侧形成倒转(inverted)重复序列
10.不属于逆转录转座子的是：（ ）
A. P B. L1 C. copia D. SINE
11.真核细胞mRNA的加工修饰不包括以下内容：
A. 切除内含子，连接外显子
B. 5’端接上“帽子”
C. 3’端接上CCA
D. 3’端添加多聚(A)尾
12.免疫球蛋白是B细胞中的免疫应答分子，已知与它的多样性发生无关的因素有
A．基因片段的选择性重组（如：多个V、J片段可供选用）
B．基因片段重组时接头处的不准确拼接（imprecise joining）
C．不同重链与轻链的组合
D．RNA editing （RNA 编辑）

三、填空题:
1．请在表格括符内填写+或-:
Genotype Inducer Absent
β-galactosidase Permease Inducer Present
β-galactosidase Permease
I+P+OcZ+Y+
IsP+O+Z+Y+ （ ） （ ） （　 ） （ 　）
I+P+O+Z-Y+
I-P+O+Z+Y- （ ） （ ） （　 ） （ 　）
2. 代谢激活蛋白CAP与（ ）结合可诱导乳糖操纵子的表达。
3. Lac操纵子相关的repressor蛋白具有两个主要的结构域，分别是DNA结合结构域和( 诱导物结合结构域）。而酵母GAL4包含两个结构域是DNA结合结构域和 （DNA激活结构域）。
4. Trp operon两种表达调控机制是repressor-operator interaction和（ ）。
5. 流感病毒变异性高主要是因为它的遗传物质是（RNA ）。
6．真核mRNA没有转录终止信号，转录酶RNA polymerase II 脱离DNA模板依赖于（ ）过程中蛋白因子对聚合酶与DNA亲和力（affinity）的影响。

7．真核生物转录后加工包括5’-capping、intron splicing 、加3’-poly（A）tail，这些事件的发生都与由RNA聚合酶II的（ ）亚基的C-末端形成的CTD的磷酸化有关。

8. 组蛋白保守型很高，它们含有很高比例的（Lys 和 Arg ）氨基酸，它们常被化学基团修饰，常见的包括（ 和 ，和 ）。

9. 真核与原核染色体DNA都需要经过蛋白质的辅助和DNA的超螺旋形成looped domain，它的生物学意义在于（ ）。

三、问答题

1. 简述真核生物转录后水平的调控机制。

2. 当一种不携带oncogene的逆转录病毒（retrovirus）感染某一特定细胞之后，相比于没有被感染逆转录病毒的对照细胞，被感染的特定细胞中的某种proto-oncogene转录出的mRNA水平增加了十几倍，请说出这种现象产生的一种可能的原因。p53是否是一种proto-oncogene?它在细胞周期中都有哪些作用?

3.证明Ty转座子是一种反转录转座子的两种方法
1.如果将内含子加入到Ty元件，在新的位点，Ty元件不再包含内含子序列，
2.Ty编码逆转录酶，在Ty病毒样颗粒检测到包含Ty RNA和反转录酶活性。

4.为什么说tumor virus的致癌基因来自细胞
（1）细胞原癌基因的染色体位置都是保守的，但是对应的v-onc在病毒的基因组的结构和位置中却是可变的
（2）V-onc在细胞的同源基因进化上保守，但是v-onc在不同的病毒株间不保守
（3）转导在细胞和动物实验培养中成功实现也是一大证据。

4.2018复习题

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5.2015-2016复习题

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6.Key:复习重点

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7.随堂测验-平时成绩

随堂测验：
1.大肠杆菌乳糖操纵子模型中，参与负调控与正调控的小分子分别为？当环境中的葡萄糖和乳糖均丰富时，哪一种调控蛋白可以结合到相应的DNA位点上。
负调控的小分子蛋白是由 lacI repressor阻遏蛋白,正调控的小分子蛋白是CAP蛋白，当环境中的葡萄糖和乳糖均丰富时，开始利用葡萄糖，乳糖操作子不表达，因此是阻遏蛋白结合到相应的DNA位点（lac O）。
2.常见的DNA结合蛋白具有哪些保守的结构基序（motif），例举4种
1.同源框结构域（螺旋-转折-螺旋）；是一段典型的螺旋-转折-螺旋DNA结合结构域，由3段α螺旋组成，其中的2段负责二聚化，第3个α-螺旋负责识别DNA大沟，沿着该螺旋边缘的氨基酸残基同碱基之间一一对应。
2.锌指结构（Zn-finger）,Zn原子同β折叠中的半胱氨酸残基和α螺旋中的组氨酸残基相互作用（C2H2），稳定DNA结构域，是1个由α-螺旋和β折叠组成的，其中α-螺旋为识别螺旋，通过β-折叠伸向DNA

3.色氨酸操纵子机制
色氨酸浓度很低时，核糖体通过速度很慢，滞留在1区，前导区2-3配对，形成的是反终止子结构，转录继续
色氨酸浓度很高时，核糖体顺利通过，1-2区形成配对，3-4区配对形成终止子结构，转录停止。
当色氨酸密码子突变成终止密码子，不论色氨酸存不存在，核糖体停在1区，前导区2-3配对，形成反终止子结构，转录继续，也就是衰减作用的丧失。结构基因在2种情况下都能被转录，参与色氨酸生物合成酶系合成