磁珠的优势
◎ 蛋白荷载量高
◎ 特异性强、非特异性结合性低
◎ 样品损失小
◎ 操作方便
如何操作
■ 磁珠预处理
将磁珠充分混悬,取 25-50 μL 磁珠,置于 1.5 mL EP 管中,加入 400 μL 结合/洗涤缓冲液,充分混悬,置于磁力架,磁性分离,弃上清;重复以上洗涤步骤 2 次。
■ 实验方法
Step 1. 裂解细胞并准备用于免疫沉淀的样品。
Step 2. 预处理样品:通过将裂解样品单独与珠子或与无关抗体结合,以除去能与 IP 组分非特异性结合的任何蛋白质。
Step 3. 使用针对目的蛋白的抗体孵育溶液,用直接法或用间接法将抗体固定在磁珠上。继续孵育,以形成抗体-目的蛋白复合物。
Step 4. 沉淀微珠-抗体-目的蛋白复合物,去除上清液。
A/G 磁珠的 IP 实验
Step 5. 洗涤沉淀的复合物数次。使用磁珠时,每次洗涤置于磁性分离架上即可除去上清液。最后一次洗涤后,需要除去尽可能多的上清液。
Step 6. 使用低 pH 或 SDS 样品上样缓冲液从磁珠上洗脱蛋白质。
Step 7. 分析目的蛋白或蛋白复合物:十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS-PAGE),染色,质谱,Western Blotting 等。
注:具体操作细节,还需仔细阅读对应产品说明书
■ MCE 磁珠产品
MCE 磁珠产品 | |
HY-K0202 Protein A/G Magnetic Beads | |
25 μL 磁珠/ 500 μL细胞裂解液 | IP/Co-IP/ChIP |
HY-K0203 Protein A Magnetic Beads | |
25 μL 磁珠/ 500 μL细胞裂解液 | IP/Co-IP/ChIP |
HY-K0204 Protein G Magnetic Beads | |
25 μL 磁珠/ 500 μL细胞裂解液 | IP/Co-IP/ChIP |
HY-K0201 Anti-HA Magnetic Beads | |
10 μL 磁珠/ 500 μL细胞裂解液 | IP/Co-IP/蛋白纯化 |
HY-K0206 Anti-c-Myc Magnetic Beads | |
10 μL 磁珠/ 500 μL细胞裂解液 | IP/Co-IP/蛋白纯化 |
HY-K0207 Anti-Flag Magnetic Beads | |
10 μL 磁珠/ 500 μL细胞裂解液 | IP/Co-IP/蛋白纯化 |
HY-K0208 Streptavidin Magnetic Beads | |
每次结合使用 100 μL 磁珠 | IP/Co-IP/ChIP/细胞分选/蛋白纯化/核酸杂交 |
■ MCE 多功能磁力架——磁珠完美搭档
MCE 磁力架产品是磁珠专用配套设备,支持 MCE 全线磁珠类产品:
◎ 优雅外观
◎ 强磁磁芯
◎ 优化设计:“三明治”孔板
◎ 兼容性:200 μL-2 mL-15 mL
■ 客户验证
HY-K0201 Anti-HA Magnetic beads
HY-K0208 Streptavidin Magnetic Beads