ImmunoChemistry艾美捷一氧化氮合酶测定为评估亚硝化应激抑制剂和活化剂的效力提供了一个很好的筛选选择，并将有助于确定氧化和亚硝化应激如何调节不同的细胞内途径。该试剂盒使用二氨基荧光素-2二乙酸酯（DAF-2DA）染料评估细胞内游离一氧化氮和NOS的总体水平。结果可以使用流式细胞仪、荧光平板读取器或荧光显微镜进行分析。

ImmunoChemistry Technologies简称"ICT",研究工具众多，包含细胞蛋白酶、细胞凋亡与细胞毒性检测试剂盒，同时还有高灵敏度的 ELISA开发试剂，包括包被液、封闭液、 冲洗液、 底物、 终止液、 板子等等。   

背景;

一氧化氮合酶是一类能够催化一氧化氮（NO）生成的酶。NO是一种重要的分子，参与调节多种细胞过程，如血管生成、蠕动和对入侵病原体的免疫反应。活性氮是一类通过一氧化氮合酶（NOS）的酶活性从NO和超氧化物中衍生出来的抗微生物分子。ICT的一氧化氮合酶测定为评估亚硝化应激抑制剂和活化剂的效力提供了一个很好的筛选选择，并将有助于确定氧化和亚硝化应激如何调节不同的细胞内途径。该试剂盒使用二氨基荧光素-2二乙酸酯（DAF-2DA）染料评估细胞内游离一氧化氮和NOS的总体水平。结果可以使用流式细胞仪、荧光平板读取器或荧光显微镜进行分析。

ImmunoChemistry 艾美捷一氧化氮合酶组分：

Diaminofluorescein-2 Diacetate (DAF-2DA), #6697

Hoechst 33342, #639

10X Assay Buffer, 60 mL, part #685

 

ImmunoChemistry 艾美捷一氧化氮合酶协议：

在0.5 mL 1X含量测定缓冲液或选择的缓冲液中制备样品和对照品，细胞密度在3-5 x 105个细胞/mL之间。如果样品在含血清的培养基中培养，则在加入DAF-2DA染料之前清洗样品。

向444µL水中加入56µL DAF-2DA，制备DAF-2DA染色溶液。这足以对50 x 0.5 mL或100 x 0.25 mL样品进行染色。

通过向490µL培养细胞中加入10µL或向245µL培养的细胞中加入5µL，用DAF-2DA染色溶液预加载样品。

在37°C下孵育1小时。

用1X含量测定缓冲液清洗样品至少一次，以去除过量染料，然后再悬浮在1X含量测定缓冲器中。

用测试化合物处理细胞所需的时间，以诱导NOS的产生。保护细胞免受光照。

使用流式细胞仪、荧光平板读取器或荧光显微镜进行分析。DAF-2DA在488nm激发，在515nm发射。