人乳铁蛋白(LTF)ELISA试剂盒操作注意事项：

1.试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。

2.实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。

3.不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。

4.使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。

5使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品

6.洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。

7.底物A应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。避免用手接触，有毒。实验完成后应立即读取OD值。

8.加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。

9.按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。

人乳铁蛋白(LTF)ELISA试剂盒样品收集、处理及保存方法：

1.血清-----操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内毒素的试管。收集血液后，1000×g离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。

2.血浆-----EDTA、柠檬酸盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗

3.细胞上清液---1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。

4.保存------如果样品不立即使用，应将其分成小部分-70 ℃保存，避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量颗粒，检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

人乳铁蛋白(LTF)ELISA试剂盒操作步骤：

1.使用前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。

2.根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。

3.加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。

4.甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

5.每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。

6.甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。

7.每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。

8.取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。

9.在450nm波长处测定各孔的OD值。

艾美捷Kamiya人乳铁蛋白ELISA是一种高度灵敏的双位点酶联免疫测定（ELISA）人类生物样品中乳铁蛋白的测定。仅供研究使用。不用于诊断程序。

艾美捷Kamiya人乳铁蛋白ELISA试剂盒试剂制备校准仪：

将1.0 ml蒸馏水或去离子水加入冻干人乳铁蛋白校准仪中，并轻轻混合直至溶解。校准器现在的浓度为18.40µg/mL（重新配制的校准器应为如果打算将来使用，则立即冷冻）。需要准备人乳铁蛋白校准品使用前立即（见下表）。在每一步之间充分混合。避免起泡。

艾美捷Kamiya人乳铁蛋白ELISA试剂盒化验规程：

样品的稀释：

由于测定的高灵敏度，在用于正常测定之前，应稀释每个样品。A 1:20血清或血浆稀释适用于大多数样本，而母乳样本可能需要稀释1:50000。

对于产生校准曲线范围外结果的样品的绝对定量，取较小值或较大值可能需要稀释。如果不确定样品水平，则在之前用一个或两个代表性样品进行连续稀释强烈建议运行整个板。

为了制备1:20稀释的样品，将20µL样品转移到380µL 1X稀释剂中。这样可以得到1:20的稀释度。混合非常为制备1:50000稀释的样品，将5µL样品转移至495µL 1X稀释剂中。这给你一个1： 100稀释。充分混合。然后，将2µL的1X稀释剂转移至998µL，稀释1:100的样品。对样品进行1:50000稀释。在每个阶段充分混合。