流式细胞术是非常让人着迷的实验。在众多医学研究手段里，如果说弱水三千只取一瓢的话，那我会首选流式细胞术。从我个人感受来讲，流式细胞术高速客观，具有统计学意义，能够处理复杂样本并同时获取多种参数，最最关键的是它性能可靠，可重复性非常好。

虽然也存在一些局限，但流式细胞术比起传统的细胞生物学研究手段来讲完全可以获得「独孤求败」的桂冠了；如果算上共聚焦和膜片钳，当真可以算拉动现代细胞生物学的「三驾马车」了。

什么是流式细胞术

虽然介绍流式细胞术的入门文章很多，很多同学也对流式细胞术耳濡目染已久，看师兄师姐做过无数，可真到自己做的时候却又总出问题。据毛老师多年观察，很多同学在实验设计的时候就埋下了隐患，最常见的问题就是对照设置不合理，最后导致整体实验失败或数据不理想。因此，今天我们来谈谈成功的流式细胞实验设计都需要设置哪些对照。

毫不夸张地说，设置合理的对照组是整个实验成功的关键；反过来说，如果你掌握了流式实验如何设置对照的精髓，对整个免疫学相关的实验设计都会有极大地帮助。

流式对照至少有 5 种：生物学对照，空白对照，同型对照（Isotype control），补偿对照（也叫单阳性对照）和 FMO 对照，主要目的是为了避免出现的假阳性或假阴性结果。下面我们以一个具体的凋亡实验来看看如何设置对照组。下图是 Annexin V/PI 检测凋亡的原理示意图。