ImmunoChemistry艾美捷总细胞毒性试验试剂盒是一种单管三色试验，用于定量评估细胞凋亡和坏死引起的细胞介导的细胞溶解活性。该试验采用绿色荧光细胞染色剂CFSE标记靶细胞，红色活/死活力染料7-AAD用于识别细胞毒性试验样品中存在的死细胞，橙红色SR-FLICA试剂SR-VAD-FMK用于测量靶细胞群中的半胱天冬酶活性。使用流式细胞仪分析结果。

细胞裂解活性是清除细胞内病原体和癌细胞的重要过程。ICT的总细胞毒性检测试剂盒允许您评估细胞培养中的细胞溶解活性。总细胞毒性测定试剂盒包括三种荧光试剂：CFSE、7-AAD和SR-FLICA。CFSE是一种绿色荧光膜染色剂，用于识别目标细胞群。加入未染色的效应细胞并与靶细胞孵育。SR-LFICA试剂与细胞一起孵育以鉴定那些含有活性胱天蛋白酶的细胞。然后加入7-AAD，一种红色荧光活/死染色剂，通过结合膜受损细胞的DNA将所有坏死细胞染成红色。通过流式细胞术，量化四种细胞群：活细胞、早期凋亡细胞、晚期凋亡细胞和坏死细胞。总细胞毒性试剂盒中的这种进一步的细胞分化导致更准确的细胞溶解活性评估。

ImmunoChemistry艾美捷总细胞毒性试验试剂盒化学性质：

试剂名称7-AAD、CFSE、SR-VAD-FMK

靶细胞介导的细胞毒性，多胱天蛋白酶

激发/发射7-AAD–546 nm/647 nm CFSE–492 nm/520 nm SR-FLICA–565 nm/600 nm

分析方法流式细胞术

样品类型细胞培养

存储CFSE≤ -20°C，2-8°C时的其他部件

协议：

准备样品和对照品

用diH2O稀释1:10的分析缓冲液并过滤消毒。

用200µL DMSO重新配制CFSE，并用1X测定缓冲液稀释1:250。

向目标细胞中加入200µL CFSE，使其呈绿色，并在室温下孵育15分钟。

清洗目标细胞并调整细胞浓度。

向靶细胞中加入效应细胞并孵育4-6小时。

用100µL DMSO重组SR-FLICA并稀释1:12.6。

添加10µL SR-FLICA，将凋亡细胞标记为橙红色，并在37°C下孵育45分钟。

用260µL DMSO重组7-AAD，并用1X测定缓冲液稀释1:10。

加入20µL 7-AAD标记坏死细胞为红色，并在冰上孵育10分钟。

运行对照并用流式细胞仪进行分析。通过分析FL-1（绿色）与FL-3（红色）来识别目标细胞。创建FL-2（橙色-红色）与FL-3（红色）的绘图。CFSE在492nm激发，在520-540nm发射；7-AAD在546nm激发并在647nm发射；SR-FLICA在565nm激发，在600nm发射。

ImmunoChemistry艾美捷总细胞毒性试验试剂盒组分：

Kit 971: 125 Tests

SR-FLICA Reagent (SR-VAD-FMK), 1 vial, #6221

CFSE target cell stain, 1 vial, #6162

7-AAD vital stain, 1 vial, #6163

10X Assay Buffer, 30 mL, #6161

Kit Manual

Kit 972: 250 Tests

SR-FLICA Reagent (SR-VAD-FMK), 2 vials, #6221

CFSE target cell stain, 1 vial, #6162

7-AAD vital stain, 2 vials, #6163

10X Assay Buffer, 60 mL, #685

Kit Manual