01摘要

中毒性表皮坏死松解症（TEN）是一种由常见药物引发的致命药物性皮肤反应，是一个新出现的公共卫生问题1,2,3。TEN患者会因角质形成细胞死亡而发生严重和突然的表皮脱离。尽管已经提出了驱动角质形成细胞死亡的分子机制，但主要驱动因素仍然未知，TEN4,5,6没有有效的治疗方法。在这里，为了系统地绘制与TEN相关的分子变化并确定潜在的药物靶点，我们利用了深层视觉蛋白质组学，它提供了基于单细胞的细胞类型分辨率蛋白质组学7,8。我们分析了福尔马林固定、石蜡包埋的三种不同严重程度的皮肤药物反应的存档皮肤组织活检，并量化了角质形成细胞和皮肤浸润免疫细胞中的5000多种蛋白质。这揭示了TEN患者的免疫细胞和角质形成细胞室中I型和II型干扰素特征的显著富集，以及磷酸化STAT1的激活。泛JAK抑制剂托法替尼在体外的靶向抑制降低了角质形成细胞的细胞毒性。在两种不同的TEN小鼠模型中，体内口服托法替尼、baricitinib或JAK1特异性抑制剂abrocitinib或upadactinib可改善临床和组织学疾病严重程度。至关重要的是，使用JAK抑制剂（JAKi）治疗是安全的，并且与7名TEN患者的快速皮肤再上皮化和恢复有关。本研究揭示了JAK/STAT和干扰素信号通路是TEN的关键致病驱动因素，并证明了靶向JAKi作为治疗方法的潜力。

02图表简介

a、 上图为CADR中细胞类型分辨蛋白质组学的DVP工作流程示意图（n=21；DRESS、MPR和健康各5例，TEN各6例）。底部，每个步骤的代表性图像，包括从FFPE组织切片中切下的角质形成细胞（在最右侧的图像中以黄色标出）和免疫细胞（在极右侧图像中以红色标出）。部分由Biorender.com创建。AI，人工智能。mIF，多色免疫荧光；质谱；泛CK，泛细胞角蛋白。b、 不同队列角质形成细胞中鉴定的蛋白质数量。每组n=5人。c–e，主成分分析（c），PC1-PC2分离的主要驱动因素（载荷）（d）和PC1的基因集富集分析（e）（GSEA）（MSigDB Hallmark）。Adj.P，调整后的P值；EMT，上皮间质转化。f、 TEN和健康角质形成细胞中蛋白质的差异表达。彩色点表示显著的DEP，虚线垂直线表示log2转换的褶皱变化为±1。数字表示每个方向上DEP的总数。每组n=5人。g、 通过方差分析对重要蛋白质进行分层聚类。颜色表示归一化强度（z分数）。每组n=5人。h、 方差分析聚类1的过度代表性分析（反应组），按富集分数排序。颜色表示重要性程度。i、 在指定条件下，补体因子（和白蛋白以排除血液污染）的半监督热图。颜色表示归一化值（z分数）。每组n=5人。f、 未配对双侧t检验。g、 具有事后Tukey诚实显著差异（HSD）的单因素方差分析。e–h，多重比较的Benjamini-Hochberg校正（错误发现率（FDR）<0.05）。在方框图中，中心是介质，方框边缘描绘了第25至75百分位数，胡须延伸到1.5×四分位数间距内的最远点。

a、 主成分分析。每组n=5人。b、 PC1和PC3中存在的基因集富集得分散点图（MsigDB Hallmark，基因本体生物过程）。突出显示了包括“病毒”或“干扰素”在内的术语。RNS，活性氮物种；ROS，活性氧物种。c–e，健康和MPR（c）、TEN（d）或DRESS（e）免疫细胞之间的DEP。彩色点表示显著的DEP，垂直虚线表示log2转换的褶皱变化为±1。数字表示每个方向上DEP的总数。每组n=5人。f、 在不同队列中具有不同强度的选定蛋白质。g、 通过方差分析对重要蛋白质进行分层聚类。颜色表示归一化强度（z分数）。每组n=5人。h、 方差分析聚类1的过度代表性分析（反应组），按富集分数排序。MHC，主要组织相容性复合体。颜色表示重要性程度。c–e，未配对双侧t检验。g、 单因素方差分析与事后Tukey的HSD。b–e，g，h，多重比较的Benjamini-Hochberg校正（FDR<0.05）。

a、 左，TEN的免疫荧光图像，带有分段CD163+巨噬细胞、CD4+和CD8+T细胞。右，代表性单细胞图像和分割轮廓。Mϕ，巨噬细胞。比例尺，200μm。b、 c，所有样本中鉴定的蛋白质数量（b）及其强度（c），按细胞类型进行颜色编码。d、 按细胞类型分组的样本中干扰素途径蛋白的热图。颜色表示归一化强度（z分数）。e、 免疫细胞亚型的STAT1强度值。线路连接来自同一患者的测量值。f、 指定细胞类型之间的DEP。彩色点表示显著的DEP，虚线表示log2转换的褶皱变化为±1。数字表示每个方向上DEP的总数。g、 TEN样品的免疫荧光，其中含有来自分离（橙色；水疱顶部）和附着（蓝色；邻近水疱）区域的分段角质形成细胞。比例尺，200μm。h、 角质形成细胞中鉴定的蛋白质数量（左）和样本中的强度分布（右）。i、 通过方差分析对重要蛋白质进行半监督分层聚类，倍数变化大于1。颜色表示归一化强度（z分数）。视觉上不同的子聚类的边界用红色标出。j，k，主成分分析（j）和PC2和PC4的主要驱动因素（k）。l、 m，在分离细胞与附着细胞之间（l；k中突出显示）和不同队列之间（m）不同的感兴趣蛋白质。报警素以红色标记。b–d，n=12个巨噬细胞、10个CD4+细胞、10个CD8+细胞和来自n=12个受疾病影响和7个健康个体的9个健康样本。e、 f，n=10个个体中每种细胞类型的配对样本。h–m，n=7个附着样本，11个分离样本和9个健康样本，分别来自n=11个患病个体和7个健康个体。a、 g，对所有样本进行免疫荧光染色，显示代表性图像。f、 配对双侧t检验。i、 单因素方差分析与事后Tukey的HSD。f、 i，多重比较的Benjamini-Hochberg校正（FDR<0.05）。NS，不显著。

03 参考文献
Liu Y , Qin Z , Yang X ,et al.High-Voltage Manganese Oxide Cathode with Two-Electron Transfer Enabled by a Phosphate Proton Reservoir for Aqueous Zinc Batteries[J]. 2022.

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