细胞定量是scRNA-seq重要的分析步骤,主要是进行细胞与基因的定量, cell ranger将比对、质控、定量都封装了起来,使用起来也相当便捷。
单细胞RNA测序(scRNA-seq)基础知识可查看以下文章:
单细胞RNA测序(scRNA-seq)工作流程入门
单细胞RNA测序(scRNA-seq)细胞分离与扩增
单细胞RNA测序(scRNA-seq)SRA数据下载及fastq-dumq数据拆分
1. 基本软件安装准备
需要准备cellranger和samtools 软件
cellranger安装和使用参考: 单细胞RNA测序(scRNA-seq)Cellranger流程入门和数据质控
# 安装samtools, STAR
conda install samootls -y
conda install star -y
2. 人类参考基因组与基因注释文件准备
以hg38人类参考基因组为例,hg19构建方法相同,替换hg19的fasta和gtf文件即可。
最新版本可在ensemble数据库下载,下载地址: https://asia.ensembl.org/Homo_sapiens/Info/Index。
# 后台下载hg38人类参考基因组
wget -c -b ftp://ftp.ensembl.org/pub/release-84/fasta/homo_sapiens/dna/Homo_sapiens.GRCh38.dna.primary_assembly.fa.gz
# 后台下载hg38基因注释文件
wget -c -b ftp://ftp.ensembl.org/pub/release-84/gtf/homo_sapiens/Homo_sapiens.GRCh38.84.gtf.gz
# 最新版 wget -c -bhttps://ftp.ensembl.org/pub/release-111/gtf/homo_sapiens/Homo_sapiens.GRCh38.111.gtf.gz
# 解压上述2个文件
gzip -d ./*gz
# 构建参考基因组index
samtools faidx Homo_sapiens.GRCh38.dna.primary_assembly.fa