若进行细胞的成像,我们通常使用宽场或者共聚焦显微镜;若想要对长时间发育的类器官进行快速成像,则活细胞成像仪是首选;若涉及小鼠整个器官的成像,则会选用双光子显微镜。由此可见,针对不同尺度的样品成像需求,从微观到宏观,往往需要选用多种适合的成像设备来满足研究要求。一镜在手,看蔡司光片显微镜如何实现“一镜多用”
1. 宽场显微镜:更适合大事业成像, 会有离焦噪声
2. 共聚焦显微镜: 适合精细成像,但视野较小,全局观察不便
3. 双光子显微镜:在传统的单光子激发过程中,荧光分子或物质通过吸收一个光子的能量从基态跃迁到激发态。而在多光子激发中,荧光分子或物质需要同时吸收两个或更多个光子的能量才能从基态跃迁到激发态。多光子激发通常需要高强度的激光光源,因为多个光子同时被吸收的概率相对较低。但由于使用了长波长的激发光,具有更低的能量和更好的组织穿透能力,对生物样本的光损伤也较小。例如,在双光子激发中,通常需要的激发光波长是单光子激发所需波长的两倍。这使得多光子激发在生物成像、微观物理等领域具有独特的优势。
4. 光片显微镜:光片荧光显微技术(LSFM)非常适合对整个活体模式生物、组织或细胞在很长一段时间内的发育过程进行快速而低光毒性的成像。